جداسازی، تکثیر و همسانه سازی ژن اسموتین از گیاه توتون و مطالعه تأثیر بیان پروکاریوتی آن بر رشد برخی قارچ های بیماری زای گیاهی

thesis
abstract

در این تحقیق ژن اسموتین گیاه توتون با تکنیک pcr از dna ژنومی گیاه توتون جداسازی و سپس در ناقل pjet1.2 همسانه سازی شد. صحت همسانه سازی ژن در ناقل با روش های colony pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید و ناقل نوترکیب حاصله pjaa-1 نام گذاری شد. ژن اسموتین پس از همسانه سازی توسط هضم آنزیمی از ناقل همسانه سازی خارج و در ناقل بیانی pet26b(+) کلون شد. صحت همسانه سازی ژن با روش های colony pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی تأیید و ناقل نوترکیب حاصله peaa-2 نام گذاری شد. ناقل peaa-2 به سویه های باکتریایی e. coli bl21(de3) و e. coli rosetta (de3) منتقل شد. بیان اسموتین در دو سویه فوق در شرایط مشابه انجام و با استخراج پروتئین تام سلولی و با تکنیک sds-page باند پروتئینی مورد نظر مشاهده و با تکنیک لکه گذاری وسترن تایید شد. با توجه به رشد بهتر باکتری های e. coli bl21(de3) در شرایط مشابه و سطح بالاتر بیان، این سویه برای ادامه کار استفاده شد. اثر فاکتورهای iptg، دما و زمان نمونه گیری بر روی بیان اسموتین با کمک روش تاگوچی بهینه سازی شد. نتایج به دست آمده نشان دادند که شرایط بهینه بیان دمای 33، زمان 16 ساعت و غلظت القا کننده iptg 7/0 میلی مولار است. بررسی ها نشان داد پروتئین نوترکیب بیان شده عمدتاً به شکل نامحلول اینکلوژن بادی در سلول انباشته می شود؛ لذا پس از محلول ساختن این توده ها در بافرهای حاوی مواد واسرشت ساز نظیر اوره و احیا کننده مانند مرکاپتواتانول شرایط ایجاد ساختمان طبیعی تأمین شد. پروتئین بدست آمده پس از دیالیز، توسط ستون نیکل تخلیص و غلظت آن با کمک روش برادفورد سنجیده شد. اثر اسموتین نوترکیب بر قارچ های rhizoctonia solani، botrytis cinerea، sclerotinia sclerotiorum، fusarium oxysporum، verticillium dahliae و alternaria solani توسط روش های radial diffusion، disk diffusion و spore germination بررسی و مشاهده شد که این پروتئین رشد قارچ های فوق را مهار می کند. از این رو می توان نتیجه گرفت که پروتئین مزبور در سیستم پروکاریوتی به صورت فعال بیان می شود و می تواند رشد قارچ را مهار کند.

similar resources

جدا سازی، تکثیر و همسانه سازی ژن ltp از گیاه برنج، مطالعه بیان پروکاریوتی و تأثیر آن بر رشد برخی قارچهای بیماریزای گیاهی

یکی از مکانیسمهای دفاعی گیاهان در برابر عوامل بیماریزا، تولید پروتئین های دفاعی (pr) می باشد. یکی از انواع این پروتئین ها، پروتئین های ناقل لیپید (ltp) هستند. بررسی های انجام شده بر روی پروتئینltp گیاهان مختلف نشان می دهد فعالیت شدید مهاری این پروتئین ها در میان پاتوژن های گیاهی بیشتر بر روی قارچ ها می باشد. همچنین محققان با تولید گیاهان تراریخت مشاهده کردند که بیان این پروتئین های ضد میکروبی ...

15 صفحه اول

مطالعه فعالیت ضد قارچ دفنسین(defensin) بیان شده در سیستم پروکاریوتی بر رشد برخی قارچ های بیماری زای گیاهی

چکیده فارسی: در این تحقیق ژن دفنسین(rs-afp1) گیاه تربچه با استفاده از pcr از ناقل puc19 جداسازی و سپس در ناقل بیانی pet26b(+) کلون گردید. صحت کلون شدن ژن در ناقل با استفاده از colony pcr وهضم آنزیمی مورد تأیید قرار گرفت و ناقل نوترکیب حاصله pet26rs1 نام گذاری گردید. ناقل pet26rs1به باکتری e. coli bl21(de3) plyss منتقل گردید و با iptg 1میلی مولار و در دماهای 37 و28 درجه سانتیگراد القاءء گردید. ...

15 صفحه اول

جداسازی و همسانه سازی ژن tlp از منابع گیاهی و بیان پروکاریوتی آن

pathogenesis (pr-pr) یکی از مکانیسم های دفاعی گیاهان در برابر پاتوژنها، تولید پروتئین های دفاعی می باشد. در بین thaumatin like protein (tlp) ، می باشد. یکی از انواع این پروتئینها related proteins دارای ( secale cereal ) و چاودار ( oryza sativa ) نظیر برنج poaceae گیاهان بعضی از اعضای خانواده می باشند. در این تحقیق جهت شناسایی، جداسازی، کلون کردن و بررسی ساختمان ژنی و پروتئینی tlp ژنهای چاود...

همسانه سازی، شناسایی و جداسازی یک ژن گلوکز اکسیداز (GOX) از قارچ Penicillium funiculosum

گلوکز اکسیداز (β-D-گلوکز:اکسیژن 1-اکسیدوردوکتاز) با استفاده از اکسیژن مولکولی به عنوان پذیرنده الکترون، اکسیداسیون β-D-گلوکز را به گلوکونیک اسید کاتالیز نموده و منجر به تولید پراکسید هیدروژن می¬شود. این آنزیم در دامنه وسیعی از قارچ¬های مختلف، عمدتاً جنس¬های Aspergillus و Penicillium تولید شده و کاربردهای وسیعی در صنایع مختلف از قبیل شیمی، داروسازی، صنایع غذایی، بیوتکنولوژی و غیره دارد. در این مط...

full text

جداسازی، شناسایی و همسانه¬سازی ژن pr10 ذرت، بیان پروکاریوتی آن و مطالعه اثر ضد قارچی پروتئین pr10 بیان شده

با روند افزایشی جمعیت کره زمین، کمبود محصولات کشاورزی به یک نگرانی مهم تبدیل شده است. از جمله عوامل کاهش این محصولات عوامل بیماریزای گیاهی به ویژه حملات قارچی می باشد. گیاهان راه کارهای گوناگونی برای مقابله با عوامل بیماریزا دارند که از آن جمله می توان به پپتیدهای ضدمیکروبی اشاره کرد. در این میان پروتئین های وابسته به پاتوژن )پروتئین های (pr، دارای اهمیت ویژه ای می باشند. خانواده pr10 از مهمتری...

جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی

چکیده سابقه و هدف فاکتور سلول بنیادی(scf)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(hscs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان scf در میزبان بیانیrosetta  بود. rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد. مواد و رو...

full text

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023